Hogyan végezzük el az elemzést PCR-rel: az eljárás leírása

A polimeráz láncreakció 30 éve ismert. Sok területen széles körben használják, a régészettől a genetikáig.

A PCR-módszer segít az apaság megteremtésében, de leggyakrabban az emberi test különböző fertőző betegségeinek azonosítására szolgál.

Hogyan történik a PCR-elemzés, és mi az? Megpróbáljuk ezeket a kérdéseket részletesen megválaszolni.

PCR-elemzés - mi ez?

A polimeráz láncreakció (PCR) a molekuláris genetikai diagnosztika nagy pontosságú módszere, amely lehetővé teszi különböző fertőző és örökletes betegségek kimutatását emberben, mind az akut, mind a krónikus szakaszokban, és sokáig a betegség megjelenése előtt.

A PCR-módszer teljesen specifikus és helyesen végrehajtott, nem adhat hamis pozitív eredményt. Azaz, ha nincs fertőzés, az elemzés soha nem fogja megmutatni, hogy mi az. Ezért nagyon gyakran a diagnózis jóváhagyása szükséges, további PCR-elemzést végzünk a kórokozó és annak természetének meghatározására.

Polimeráz láncreakció (PCR) 1983-ban, amelyet Carey Mullys (USA) fejlesztett ki, amelyre 1993-ban a kémiai Nobel-díjat kapta.

Mi az előnye ennek a módszernek?

Ezzel a módszerrel végzett diagnosztika lehetővé teszi, hogy a kórokozót közvetlenül megtaláljuk a vizsgált anyagokban lévő génben. Ez a nemi szervek fertőzéseinek, látens fertőzéseinek és különböző nemi betegségeinek legpontosabb elemzése.

A laboratóriumi kutatások más módszerei szerinti PCR-diagnosztika különbségei a következők:

  • az eljárás célja a patogén azonosítása;
  • A PCR diagnózis univerzális: több kórokozó kimutatására;
  • betegségek, csak egy páciens biológiai mintája elegendő;
  • a módszer nagyon érzékeny, és nem jár más keresztreakciókkal.

Ezenkívül a PCR-diagnosztika előnye, hogy a beteg bármely biológiai anyaga alkalmas az elemzésre: vér, a nemi szervekből történő ürítés, vizelet, sperma.

Milyen fertőzések mutatkozhatnak a PCR-en?

Számos kórokozó jelen lehet a testben, beleértve a „rejtett ”akat is, amelyek hosszú ideig nem jelentkeznek.

A PCR vizsgálata lehetővé teszi az ilyen fertőzések kimutatását:

  • májgyulladás;
  • ureplazmoz nemi szervek;
  • kandidózis (thrush);
  • a genitális traktus chlamydiái;
  • papilloma vírusfertőzés;
  • herpesz;
  • a rákos sejtek jelenléte;
  • mycoplasmosis;
  • bakteriális vaginosis;
  • fertőző mononukleózis;
  • trichomoniasis;
  • értékelje a hormonális állapotot;
  • AIDS (HIV).

A PCR vizsgálatához használt anyag általában köpet, nyál, vizelet és vér. Az elemzés előtt gondosan fel kell készülnie rá, miután megkapta az előzetes konzultációt egy orvossal.

A PCR-hez általában vért használunk. A jó eredmények azt mutatják, hogy a vizsgálathoz használt anyagot a méhnyakcsatornából vagy a húgycsőből vettük. Ebben az esetben a legjobb, ha PCR diagnosztikát végzünk legkésőbb a közösülés után.

PCR-fajták

A PCR-t számos területen használják elemzéshez és tudományos kísérletekhez. Különböző elemzési módszerek léteznek:

  1. A reverz transzkripciós PCR-t (Reverse Transcription PCR, RT-PCR (English)) egy ismert szekvencia amplifikálására, izolálására vagy azonosítására használjuk RNS könyvtárból.
  2. Inverz PCR (inverz PCR (Eng.)) - akkor használatos, ha csak egy kis terület ismert a kívánt sorrendben. Ez az eljárás különösen akkor hasznos, ha a szomszédos szekvenciákat a DNS-be való beillesztés után szükséges meghatározni.
  3. A beágyazott PCR-t (beágyazott PCR) használjuk a reakció melléktermékek számának csökkentésére. Két pár primert használunk, és két egymást követő reakciót hajtunk végre.
  4. Az aszimmetrikus PCR-t (aszimmetrikus PCR) akkor hajtjuk végre, ha az eredeti DNS egyik láncát fel kell erősíteni. Egyes szekvenálási és hibridizációs vizsgálatokban használatos.
  5. Kvantitatív PCR (kvantitatív PCR, Q-PCR (Eng.)) Vagy a valós idejű PCR-t arra használjuk, hogy közvetlenül megfigyeljük egy adott PCR-termék mennyiségének mérését minden egyes reakcióciklusban.
  6. Lépés PCR (Touchdown PCR (Eng.)) - ez a megközelítés csökkenti a nem specifikus primer kötődés hatását.
  7. Csoportspecifikus PCR (csoportspecifikus PCR) - PCR a kapcsolódó szekvenciákhoz azonos vagy különböző fajok között, konzervatív primerek alkalmazásával ezekhez a szekvenciákhoz.

Ha a sablon nukleotidszekvenciája részlegesen vagy ismeretlen, akkor degenerált primerek alkalmazhatók, amelyek szekvenciája degenerált pozíciókat tartalmaz, amelyekben bármely bázis található. Például a primer szekvencia lehet: ... ATH ..., ahol H jelentése A, T vagy C.

Milyen biológiai anyagokat vizsgálnak?

A PCR-vizsgálatokhoz használt anyag, amelyben idegen baktérium-DNS kimutatható, vagy a vírus DNS-je vagy RNS, különböző biológiai közegekből és humán folyadékokból állhat:

  1. Vizelet. Alkalmazható a férfiak és a húgyúti szervek urogenitális traktusának fertőző léziókban (férfiaknál a vizelet alkalmazása anyagként helyettesíti az epiteliális kaparást).
  2. Köpet. A tuberkulózis diagnosztizálására szolgál, és ritkábban a chlamydia és a mikoplazmózis légzési formáinak diagnosztizálására. A 15-20 ml mennyiségben levő köpet steril (eldobható) palackba gyűjtjük.
  3. Biológiai folyadékok. A prosztatarák, a pleurális, a cerebrospinalis, a magzatvíz, az ízületi folyadék, a bronchoalveoláris mosás, a nyál összegyűjtése a jelzések szerint történik.
  4. Epithelialis kaparó nyálkahártyákból. Általában szexuális úton terjedő betegségek (STD-k) diagnosztizálására használják, mint például gonorrhoea, chlamydia, mycoplasmosis, ureaplasmosis, trichomoniasis, gardnerellezis, herpesz és más, a nyálkahártyákat érintő fertőzések.
  5. Biopszia. A gyomor és a nyombélbél leggyakrabban használt biopsziája a Helicobacter pylori fertőzés azonosítására.
  6. Vér, plazma, szérum. A hepatitis B, C, D, G vírusok, herpesz, CMV, HIV, humán gének PCR analízisére használatos.

Hogyan kell felkészülni az elemzésre?

A PCR eredmény megbízhatósága közvetlenül függ az anyagnak a vizsgálathoz való szállításának helyességétől. Az anyag nem lehet szennyezett, ellenkező esetben a vizsgálat eredménye nem lesz objektív. A PCR-elemzés benyújtása előtt a legfontosabb ajánlások a következő követelmények:

  1. A vizeletet reggel steril tartályban szállítják.
  2. A fertőzés vérvizsgálatát egy üres gyomorban kell bevenni reggel.
  3. Nem szükséges szexuális aktivitást mutatni az elemzést megelőző napon.

Az elemzés eredménye az eljárás után 1,5-2 napon belül elkészül. Vannak olyan helyzetek, ahol az eredmény ugyanazon a napon készíthető el.

A CRP elemzésének dekódolása

A bemutatott kutatás értelmezési folyamata az egyszerűségének köszönhető. A PCR-elemzés eredményei az anyag kézbesítését követő 1,5-2x napon belül nyerhetők. Bizonyos esetekben az eredmény az első napon készen áll, és ez az, ami azt jelenti:

  • A negatív eredmény azt jelzi, hogy a fertőző ágens hiányzik a diagnosztizált anyagból.
  • A Pcr pozitív azt jelenti, hogy a patogén DNS vagy RNS jelen van az emberi testben.

Egyes esetekben a mikroorganizmusok mennyiségi meghatározása történik. Ez különösen igaz az opportunista mikroorganizmusok által okozott betegségekre. Mivel ezek a baktériumok csak túlzott mennyiségű negatív hatással rendelkeznek.

A PCR kvantitatív elemzése szintén fontos a terápiás taktikák megválasztásában és a vírusfertőzések, például a HIV és a hepatitis vírusok kezelésének szabályozásában.

Mennyire pontos a fertőzések PCR-diagnózisa?

A PCR-módszert nagy pontosság, specifitás és érzékenység jellemzi. Ez azt jelenti, hogy az elemzés:

  • pontosan meghatározza a fertőzés jelenlétét vagy hiányát;
  • pontosan meghatározza, hogy milyen fertőzés (specifitás);
  • a biológiai anyagban lévő mikrobák nagyon alacsony DNS-tartalmával történő fertőzés kimutatása, t
  • amelyet kutatásnak vetettek alá (érzékenység).

PCR-elemzés: ár és idő

Egy adott elemzés ára attól függ, hogy melyik fertőzésről van szó. Körülbelül árak és feltételek:

  1. STI: 300-500 rubel, idő - 1 nap;
  2. Epstein-Barr vírus, humán papillomavírus, herpesz, citomegalovírus: 300-500 rubel, idő - 1 nap;
  3. Hepatitis A, B, C, D, G: 650 rubel kvalitatív elemzése, 2000 rubel kvantitatív elemzése. Feltételek - legfeljebb 5 nap;
  4. A hepatitis C vírus elleni antitestek (Anti-HCV) - 420 rubel;
  5. A hepatitis C vírus elleni antitestek, IgM (Anti-HCV IgM) - 420 rubel;
  6. Helicobacter pylori (Helicobacter pylori): 300-400 rubel, kifejezések - 1 nap;
  7. HIV (antitestek és antigének) - 380 rubel;
  8. HIV RNS, minőségileg - 3500 rubelt;
  9. HIV RNS, kvantitatívan - 11 000 rubel.

Pénzt takaríthat meg, és kiválaszthat egy fix elemcsomagot. Ez a szolgáltatás a klinikák többségét biztosítja, ahol az elemzést a CRP módszerével (invitro, onclinics, stb.) Végezheti el.

Loading...

Hagyjuk Meg Véleményét